BAKTERI

LAPORAN PRAKTIKUM

ISOLASI ENZIM DARI MIKROBA Bacillus subtilis

NAMA                       : MERLIN MALIMONGAN
NIM                            : H31111010
HARI/ TGL PERC   : RABU/ 1 MEI 2013
KELOMPOK            : I (SATU)
ASISTEN                   : ARKIEMAH HAMDA

LABORATORIUM BIOKIMIA
JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS HASANUDDIN

MAKASSAR
2013

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

            Mikroorganisme tersebar luas di alam lingkungan dan sebagai akibatnya produk pangan jarang sekali yang steril dan umumnya tercemar oleh berbagai jenis mikroorganisme. Bahan pangan selain merupakan sumber gizi bagi manusia, juga sebagai sumber makanan bagi perkembangan mikroorganisme. Pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme dalam makanan sangat erat hubungannya dengan kehidupan manusia (Buckle, dkk., 2007).

Enzim mikroba mendapatkan banyak perhatian karena aplikasi industri yang prosesnya ramah lingkungan. Kenaikan pasar global enzim industri pada tingkat pertumbuhan tahunan rata-rata sekitar 3,3 %. Sebagian besar enzim berasal dari mikroba yang berkembang di suhu kamar, pH alami dan kondisi sederhana lainnya (Pelezar dan Chan, 2007).

Enzim amilase adalah enzim yang menghidrolisis pati menjadi dekstrin, kemudian menjadi maltosa, dan selanjutnya menjadi glukosa. Enzim ini memecah ikatan α-1,4 maupun α-1,6 glikolisis. Hidrolisis dapat ditandai dengan berubahnya warna kompleks pati-iodium dari biru atau ungu menjadi coklat muda                   (Tim Dosen Kimia, 2013).

Bakteri merupakan mikroba uniseluler. Pada umumnya, bakteri tidak mempunyai klorofil. Ada beberapa yang fotosintetik dan reproduksi aseksualnya secara pembelahan. Bakteri tersebar luas di alam, di dalam tanah, di atmosfer, di dalam endapan-endapan lumpur, dalam air, pada sumber air panas, di daerah antartika, dalam tubuh manusia, hewan dan tanaman. Jumlah bakteri tergantung keadaan sekitar. Misalnya, jumlah bakteri di dalam tanah tergantung jenis dan tingkat kesuburan tanah (Hidayat, dkk., 2006).           

Pada biakan produksi (medium produksi), bila  bakteri diinokulasikan  ke dalam suatu medium yang sesuai pada keadaan yang optimum bagai pertumbuhannya,  maka terjadi kenaikan jumlah  yang sangat tinggi dalam waktu yang relatif pendek. Pada beberapa spesies populasi panen sel  terbanyak yang dapat diperoleh tercapai dalam waktu  24 jm yaitu mencpai 10 sampai 15 milyar sel bakteri permililiter. Perbanyakan  seperti ini disebabkan oleh pembelahan sel secara aseksual (Pelezar dan Chan,2007).

Produksi beberapa produk sering tidak tampak pada saat isolasi. Oleh karena itu organisme sering diisolasi secara random. Sebagai contohnya adalah pada produksi antibiotik, di mana pendukung pertumbuhannya adalah konsentrasi asam amino nukleotida. Medium yang diharapkan adalah medium yang memungkinkan isolat dapat tumbuh dengan baik (Pelezar dan Chan,2007).

Sifat khusus pada suatu koloni  pada medium padat dapat dilihat  dari sifat-sifat koloni  yng tumbuh pada agar-agar  lempengan, pada agar-agar miring, dan pada agar tusukan gelatin. Pada agar-agar lempengan, bentuk koloni dilukiskan secara titik-titk, bulat, berbenang, tak teratur, serupa dan serupa kumparan. Sifat koloni pada agar-agar miring berkisar pada bentuk koloni, dan sifat-sifat itu dinyatakn seperti pedang, duri, tasbih, titik, batang ataupun akar. Pada tusukna gelatin bentuk koloninya berbeda-beda tergantung dari kemampuannya  mengencerkan gelatin. Jika  bakteri mampu mengencerkan gelatin, maka bentuk koloninya dapat berupa  kawah, mangkuk, corong,pundi-pundi maupun berlapis. Jika bakteri tidak mampu mengencerkan gelatin, maka bentuk koloninya dapat berupa pedang, tasbih, berjonjot, dan berupa batang (Dwidjoseputro, 2003).

                        Tahap pertama dilakukan adalah mengisolasi bakteri pendegradasi lipid dengan mengunakan metode seri pengenceran (platting method) yang dilakukan dengan mengambil sebanyak 10 ml sample dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang berisi 90 mL larutan fisiologis sehingga didapat pengenceran 10^-1, untuk mendapatkan pengenceran 10^-2 dilakukan dengan mengambil 1 mL dari pengenceran 10^-1 dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 mL larutan fisologis, demikian seterusnya sampai dibuat pengenceran 10^-6. Masing-masing seri pengenceran diambil 1 mL dimasukkan kedalam cawan petri yang telah berisi media Siera kemudian diratakan dengan menggunakan hoky stick. Lalu diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 30 ^oC koloni yang tumbuh diamati secara makroskopis meliputi bentuk, ukuran, tekstur dan warna. Berdasarkan perbedaan penampilan koloni     lalu dilakukan tahap pemurnian sehingga akan diperoleh sejumlah isolat    (Darmayasa, 2008).

Produksi beberapa produk sering tidak tampak pada saat isolasi. Oleh karena itu organisme sering diisolasi secara random. Sebagai contohnya adalah pada produksi antibiotic, di mana pendukung pertumbuhannya adalah konsentrasi asam amino nukleotida. Medium yang diharapkan adalah medium yang memungkinkan isolat dapat tumbuh dengan baik (Hidayat, dkk., 2006).

            Medium padat dapat digunakan untuk isolasi penghasil enzim tertentu. Teknik ini biasanya meliputi penggunaan medium selektif yang berhubungan dengan substrat untuk pertumbuhan yang mendukung tipe penghasil enzim. Tanah dengan berbagai pH dugunakan sebagai inokulum awal pada isolasi spesies Bacillus yang menghasilkan alkalin protease. Sampel tanah dipasteurisasi untuk membatasi organisme yang tidak membentuk spora, kemudian ditebarkan pada media agar. Luas zona jernih yang dihasilkan tidak dapat digunakan secara kuantitatif untuk seleksi penghasil yang tinggi karena tidak ada hubungan antara ukuran zona jernih dan produksi alkalin protease dalam kultur cair. Oleh karena itu yang penting adalah pemilihan bahan awal (Hidayat, dkk., 2006).